ARMS PCR是一项在PCR基础上发展起来的新方法,常用于检测DNA中各种点突变米乐m6官网。翌圣ARMS PCR产品具有阻滞能力强、灵敏度高的特点,可检测低至10 ng/μL DNA中0.05%的突变,可助力IVD企业肿瘤精准分子诊断米乐m6官网,用药指导等产品的快速开发。
当今肿瘤疾病人群日趋增多,检测方法也多种多样,有传统的病理活检,核磁共振成像,有通过肿瘤标志物进行化学发光免疫筛查,还有通过分子生物学方法的PCR检测。今天小编就来给大家介绍分子生物学中常用来做肿瘤领域精准分子诊断的方法--ARMS PCR。
ARMS PCR通过引物3’末端引物设计控制等位基因特异性延伸,并结合Taqman探针的方法检测荧光信号值,从而判断野生型等位基因和突变型野生基因。换言之,我们应用ARMS PCR对野生型和突变型等位基因检测时,可在引物设计过程中将等位基因两条上游引物中3’端核苷酸不同,米乐m6官网两条引物分别对野生型和突变型特异,在耐热Taq DNA聚合酶作用下,与模板不能完全匹配的上游引物将不能完全形成互补碱基对,从而形成错配,链延伸反应因3’,5’-磷酸二酯键形成障碍而受阻,不能产生PCR产物,而与模板匹配的引物体系则可以扩增出相应的PCR产品,Taqman探针上相应的荧光基团可产生荧光信号被仪器检测到,最终计算出对应的△CT值。
灵敏度高:突变型引物可检测低至10 ng/μL DNA中0.05%的突变;
实验:模板投入量5 μL,突变型引物扩增 10 ng/μL 野生型模板和等拷贝数突变型质粒
图2 野生型引物扩增野生型模板和突变型模板。根据扩增曲线发现野生型模板无起峰或野生型和突变型Ct值差异≧6-8,达到实验预期,米乐m6官网成功区分野生型和突变型基因。
图4 根据扩增曲线 ng/μL 的野生型gDNA 背景下检出率可高达0.05% ,并经过商业化标准品进一步验证,说明我司产品检出率良好。
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